多肽因结构多样、性质复杂，其分析检测需结合多种技术手段。从基础的分离纯化到精准的结构鉴定，每一步都依赖于科学工具的合理选择。

分离纯化：解析多肽混合物的 “第一步”

• 反相 HPLC（RP-HPLC）：最常用技术，基于多肽疏水性差异分离。固定相为非极性填料（如 C18），流动相由水相（含添加剂）和有机溶剂（如乙腈）组成，通过调节配比实现不同多肽的洗脱。

• 离子交换色谱（IEC）：适用于极性较强的多肽，利用多肽与固定相之间的静电作用力差异分离，流动相离子强度是关键调控因素。

• 体积排阻色谱（SEC）：依据多肽分子量大小分离，常用于测定分子量分布或去除样品中的小分子杂质。

   

相比传统 HPLC，采用更小粒径填料，分离效率更高、速度更快，尤其适合复杂多肽混合物的快速分析。

结构鉴定与定性：揭示多肽的 “分子密码”

• 多肽鉴定的核心工具，通过测定质荷比（m/z）确定分子量，并结合碎片信息解析氨基酸序列。

• 常用联用技术：HPLC-MS（或 UHPLC-MS），先经色谱分离，再由质谱鉴定，兼顾分离效率与鉴定精度。

• 关键离子源：电喷雾电离（ESI）适用于溶液状态多肽，基质辅助激光解吸电离（MALDI）适合固态样品，可实现高通量分析。

通过酸水解将多肽转化为游离氨基酸，经衍生化后用色谱或质谱检测，可确定氨基酸组成及含量，是多肽定量的基础方法。

辅助分析技术：拓展多肽研究的维度

• 毛细管电泳（CE）：基于多肽电荷差异和淌度不同实现分离，适合电荷差异显著的多肽分析，具有高分辨率和低样品消耗量的特点。

• 圆二色谱（CD）：用于分析多肽的二级结构（如 α- 螺旋、β- 折叠），通过测定多肽对圆偏振光的吸收差异，推断其空间构象。

• 核磁共振（NMR）：可解析多肽的三维结构及动态变化，为理解其生物活性与结构的关系提供关键信息。

技术选择原则

实际分析中需根据多肽性质（疏水性、分子量、电荷等）和研究目的（分离纯化、定量分析、结构鉴定等）选择技术。例如：

• 复杂混合物的分离优先选 RP-HPLC 或 UHPLC；

• 未知多肽的结构鉴定必须结合质谱技术；

• 构象研究则需 CD 或 NMR 辅助。

多肽分析技术的发展，正朝着更高分辨率、更高灵敏度、更自动化的方向推进，为多肽药物研发、功能研究提供了坚实的科学支撑